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液氮罐细胞冻存浅谈

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液氮罐细胞冻存浅谈

发布日期:2021-04-29 作者: 点击:

  冻胞是细胞存活的关键因素之一。运用冷冻技术,让细胞在-196~C的液氮环境下低温存活,可使细胞暂时脱离生长状态,使其细胞特性得以维持,重新唤醒细胞进行冷冻操作。而且适度地存活肯定量的细胞,可以防范因生长中的细胞受到污染或其他不确定的变异而丢失的细胞,起到细胞保种的作用。此外,还可以利用细胞冻存的情况来获取、赠送、交换和运输某些细胞。包头液氧在细胞冷冻过程中,加入到制造基中的掩护剂——终末5%~15%的甘油或二甲基亚砜,可以使溶液冰点降低,同时在迟钝的冻结条件下,细胞内水分渗透,去掉冰晶形成,从而阻止细胞毁伤。在-25℃以下开始的比例冷冻速度在-1~-2℃/min,在-80℃以下可加速,在-196℃以下可直接进入液氮。


包头液氧


  目前广泛使用的掩护剂是二甲亚砜和甘油,它们对细胞分子量小、溶解性强、易于穿透细胞。


  实施质料


  仪表:液氮罐,冻存管,离心管,吸管,离心机等。


  药剂:胰酶0.25%,制造基,含掩护剂造就基(即冻存液)


  冻存溶液配制:制造基参与甘油或DSMO的过程,浓度可达到5%-20%。根据不同的细胞,不同的掩护剂种类和用量也不同。配制后4℃下存活。


  保持节奏。


  消化细胞,将细胞的悬液网络插入离心管。


  000rpm离心10分钟,弃去上清液。


  沉降后加有掩护液,计数,调匀到5106/ml左右。


  将悬液分成冻存管,每管各1ml。


  封好冻存管。若使用安瓶封火,封火要严格,否则苏醒时容易出现爆裂。


  贴上标明细胞种类的标签,冻结日期。冷冻容器外面系着金属重量和细绳。


  冷却顺序如下:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷藏室(30分钟)→低温冰箱(1小时)→低温冰箱(-30℃)→气体氮(30分钟)→液氮。


  注意事项:操作时要注意防止液氮冻伤。液体氮气定期检查,随时补充,不克不及挥发清洁,一般30升液体氮气可以用1~1.5个月。


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关键词:包头液氧

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